一、什么是同型對照抗體?

同型對照(Isotype Control)指與一抗相同種屬來源、相同亞型、相同劑量的免疫球蛋白，用于消除由于抗體非特異性結(jié)合而產(chǎn)生的背景信號。

二、為什么使用同型對照?

抗體在結(jié)構(gòu)上都其相似，大部分是恒定區(qū)，只有一小部分可變區(qū)不同，決定其與抗原的特異性結(jié)合。抗體分子結(jié)構(gòu)的恒定區(qū)由保守區(qū)構(gòu)成，在同型的抗體中其序列往往相同。

而抗體保守區(qū)是決定抗體作用機(jī)制的關(guān)鍵，其中的Fc region能參與調(diào)控并結(jié)合各類細(xì)胞上的Fc受體。所以同型對照(Isotype Control)可用于消除由于抗體非特異性與細(xì)胞結(jié)合而產(chǎn)生的假陽性干擾。同型對照也是陰性對照，其主要目的是確定一抗的結(jié)合是特異性的，而不是非特異性的Fc受體或與其他蛋白的相互作用。

三、同型對照用于哪些實驗？

1.流式細(xì)胞實驗

同型對照一直是流式細(xì)胞術(shù)中常用的陰性對照。同型對照可模擬FcR或其他蛋白非特異性結(jié)合和染色，還可以用于設(shè)定流式細(xì)胞儀的電壓，有效節(jié)約實驗成本。

染色方式為：樣本管：一抗+樣本，同型對照管：同型對照+樣本。

在以下情況中，實驗人員必須使用同型對照確保流式實驗的準(zhǔn)確性：

● 實驗人員流式經(jīng)驗較少

● 進(jìn)行胞內(nèi)蛋白流式實驗，針對細(xì)胞內(nèi)靶標(biāo)的抗體即使不與抗原結(jié)合，也常常會出現(xiàn)被攔在細(xì)胞內(nèi)。

● 實驗不常見或特異性不高的抗體

2.免疫熒光和免疫組化，當(dāng)同型對照的顯色信號弱于特異性抗體，才能說明是抗體和樣本中的目標(biāo)蛋白結(jié)合。

3.IP（免疫沉淀）實驗，下圖的control IgG為同型對照，同型對照樣本只能檢測到抗體的重鏈條帶，沒有目的蛋白條帶。

4.Elisa實驗檢測某種特異抗體時，可用同型對照排除非特異結(jié)合。

四、如何選擇同型對照？

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