一、ELISA原理介紹

ELISA即酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)，其基本原理是將一定濃度的抗原或者抗體通過(guò)物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面，加入待檢標(biāo)本，通過(guò)酶標(biāo)物顯色的深淺間接反映被檢抗原或者抗體的存在與否或者量的多少。ELISA技術(shù)作為免疫標(biāo)記技術(shù)（包含免疫熒光技術(shù)，免疫放射技術(shù)，免疫酶技術(shù)和免疫膠體金技術(shù)）中的一種，已廣泛應(yīng)用于科研和臨床實(shí)驗(yàn)中，具有快速、定性或者定量甚至定位的特點(diǎn)。

ELISA可用于測(cè)定抗原，也可以測(cè)定抗體。在這種測(cè)定方法中有3種必要的試劑：①固相的抗原或抗體；②酶標(biāo)記的抗原或抗體；③酶作用的底物。根據(jù)試劑的來(lái)源和標(biāo)本的性狀以及檢測(cè)的具備條件，可設(shè)計(jì)出各種不同類(lèi)型的檢驗(yàn)方法。常用的幾種方法有雙抗體夾心法，間接法測(cè)抗體，競(jìng)爭(zhēng)法，雙抗原夾心法測(cè)抗體，捕獲法測(cè)抗體。

雙抗體夾心法，其基本原理是將一定量的包被抗體以物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面，加入無(wú)關(guān)蛋白載體封閉未結(jié)合位點(diǎn)，然后加入含有抗原的待測(cè)樣品，通過(guò)加入酶標(biāo)記特異性抗體后用TMB底物顯色，微孔板中顏色的深淺與待測(cè)物的濃度呈正相關(guān)。該方法適用于測(cè)定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原，不適用于測(cè)定半抗原及小分子單價(jià)抗原，因其不能形成兩位點(diǎn)夾心。

間接法，將抗原與固相載體相連結(jié)，形成固相抗原。洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。加入特異性一抗與固相抗原相結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后，加酶標(biāo)二抗。固相免疫復(fù)合物中的抗體與酶標(biāo)二抗結(jié)合，從而間接地標(biāo)記上酶。洗滌后，加底物顯色,微孔板中顏色的深淺與待測(cè)物的濃度呈正相關(guān)。

競(jìng)爭(zhēng)法，其基本原理是將合適濃度的包被抗體包被于微孔板中，加入無(wú)關(guān)蛋白載體封閉未結(jié)合位點(diǎn)，加入標(biāo)準(zhǔn)品（樣本）和生物素標(biāo)記的抗原物質(zhì)進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，經(jīng)合適的溫度和一定時(shí)間的孵育，洗滌后，加入HRP標(biāo)記的鏈霉親和素進(jìn)行反應(yīng)，TMB顯色，微孔板中顏色的深淺與待測(cè)物的濃度呈負(fù)相關(guān)。

雙抗原夾心法，將合適濃度的包被抗原包被于微孔板中，加入無(wú)關(guān)蛋白載體封閉未結(jié)合位點(diǎn)，然后加入含有抗體的待測(cè)樣品和標(biāo)準(zhǔn)品。孵育后，用洗滌緩沖液除去未結(jié)合的偶聯(lián)物。然后加入生物素化的檢測(cè)抗原，與包被抗原偶聯(lián)抗體抗原復(fù)合物結(jié)合。洗去未結(jié)合的偶聯(lián)物后，加入酶標(biāo)鏈霉親和素。第三次洗滌后，加入TMB底物觀(guān)察HRP酶促反應(yīng)。TMB經(jīng)HRP催化生成藍(lán)色產(chǎn)物，加入酸性停止液后變?yōu)辄S色。在酶標(biāo)儀上讀取450nm處的od吸光度。

捕獲法，以檢測(cè)某種抗原的IGM抗體為例，其基本原理是先將針對(duì)IgM的二抗包被于固相載體，加入待測(cè)標(biāo)本，其中IgM類(lèi)抗體可被固相抗體捕獲，再加入特異性抗原，其與固相上捕獲的IgM抗體結(jié)合后，加入酶標(biāo)記抗體 ，形成固相二抗-IgM-抗原-酶標(biāo)記抗體復(fù)合物，加底物顯色后，即可對(duì)待測(cè)標(biāo)本中IgM是否存在及含量進(jìn)行測(cè)定。

二、FineTest® ELISA產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

1.原料自產(chǎn)

試劑盒開(kāi)發(fā)生產(chǎn)中蛋白抗體原料的質(zhì)量對(duì)試劑盒品質(zhì)影響至關(guān)重要。FineTest®擁有自己的蛋白和抗體研發(fā)生產(chǎn)平臺(tái)，原料大部分可以實(shí)現(xiàn)自產(chǎn)，質(zhì)量可控。另外FineTest®擁有自己的細(xì)胞庫(kù)，血液組織樣品庫(kù)，可以提供更豐富和更詳細(xì)的數(shù)據(jù)驗(yàn)證，便于客戶(hù)自行選擇滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)需要的產(chǎn)品。品種廣泛的蛋白抗體原料也是我們能根據(jù)市場(chǎng)（客戶(hù)）需求快速調(diào)整或者定制試劑盒產(chǎn)品的基礎(chǔ)。

2.多維度質(zhì)控

FineTest®對(duì)試劑盒各組件生產(chǎn)嚴(yán)格質(zhì)控環(huán)節(jié)。FineTest®擁有1000平以上的萬(wàn)分別GMP車(chē)間，保障生產(chǎn)環(huán)境的潔凈度，提高產(chǎn)品的可靠性。通過(guò)使用高精密機(jī)器生產(chǎn)，和嚴(yán)格的質(zhì)控抽檢，生產(chǎn)批次差小于5%，同時(shí)進(jìn)行廣泛的試劑盒性能測(cè)試，以滿(mǎn)足客戶(hù)對(duì)特異性，準(zhǔn)確度和靈敏度的要求。另外，通過(guò)在ELISA試劑盒開(kāi)發(fā)過(guò)程中生成高純度的內(nèi)控校正蛋白，用于不同批次試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品的校正，進(jìn)而保障不同批次間試劑盒檢測(cè)數(shù)據(jù)的一致性。所有批次的試劑盒均經(jīng)過(guò)內(nèi)控校正蛋白校對(duì)，不會(huì)出現(xiàn)任何結(jié)果偏差。

3.試劑優(yōu)化降低檢測(cè)干擾

影響免疫測(cè)定的特異性的因素主要包含抗體原料的交叉反應(yīng)和樣本基質(zhì)環(huán)境的干擾效應(yīng)。交叉反應(yīng)是指，無(wú)關(guān)物質(zhì)被抗體對(duì)識(shí)別而導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)假陽(yáng)性。干擾效應(yīng)是指，樣本基質(zhì)中的其他物質(zhì)可改變抗原-抗體間結(jié)合，而阻止目標(biāo)分析物被檢測(cè)出來(lái)。這些干擾成分種類(lèi)眾多，一類(lèi)是干擾性抗體，如眾所周知的人抗鼠抗體（Human anti-mouse Antibodies，HAMA）、一般的抗動(dòng)物抗體、嗜異性抗體（Id）或類(lèi)風(fēng)濕因子（rheumatoid factors，RF）；一類(lèi)是樣品中的內(nèi)源性物質(zhì)引起，如高脂和高鹽濃度、高粘度可以導(dǎo)致目標(biāo)分析物被封閉、產(chǎn)生交叉反應(yīng)；另外高度豐富的血清內(nèi)源性蛋白，如白蛋白、補(bǔ)體因子、溶血酶、α-1抗胰蛋白酶或纖維蛋白原等都會(huì)干擾免疫分析。

試劑盒經(jīng)合適的優(yōu)化和測(cè)試，這些問(wèn)題都可被緩解。假陽(yáng)性結(jié)果可能由樣本的基質(zhì)效應(yīng)引發(fā)的，這些基質(zhì)效應(yīng)只有經(jīng)過(guò)多次驗(yàn)證和質(zhì)控測(cè)試才能被確認(rèn)。這就是為什么一個(gè)成功的ELISA試劑盒不能僅僅只通過(guò)信號(hào)產(chǎn)生與否來(lái)評(píng)判，而應(yīng)看信號(hào)是否由目標(biāo)分析物而產(chǎn)生的。這種情況大多數(shù)可通過(guò)線(xiàn)性稀釋實(shí)驗(yàn)來(lái)進(jìn)行驗(yàn)證。

為保障試劑盒特異性，我們主要有這3方面的努力，從原料上精選單克隆抗體和多克隆抗體對(duì)；從反應(yīng)溶液體系上優(yōu)化包被緩沖液、樣本稀釋液和抗體稀釋液來(lái)抵抗基質(zhì)效應(yīng)；從測(cè)定物本身特性?xún)?yōu)化，天然抗原和重組蛋白抗原與捕獲抗體結(jié)合力的強(qiáng)弱由于結(jié)合后蛋白構(gòu)象的改變而不同進(jìn)而會(huì)影響檢測(cè)值的區(qū)別。

菲恩生物檢測(cè)試劑相比傳統(tǒng)試劑

1.背景低；2.樣本檢測(cè)CV值��；3.性?xún)r(jià)比高；4.更低檢測(cè)限度。

4. 更高靈敏度: 可檢測(cè)fg/mL別的蛋白

小能檢測(cè)值是區(qū)別于空白值所能觀(guān)測(cè)到的統(tǒng)計(jì)值。它是通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)空白點(diǎn)多個(gè)復(fù)孔的2倍標(biāo)準(zhǔn)差與平均值之和，并按照標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)值計(jì)算而來(lái)。靈敏度越高，可用的動(dòng)力學(xué)范圍（標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)范圍）越寬。ELISA試劑盒經(jīng)過(guò)Accquant信號(hào)放大系統(tǒng)優(yōu)化可保障高信號(hào)強(qiáng)度，低背景和的更高檢測(cè)靈敏度，靈敏度可達(dá)fg/mL別。

例如：Human HS-IL-6(High sensitive Interleukin 6) Accquant ELISA Kit

用途 ：用于體外定量檢測(cè)人血清，血漿，細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它生物樣品中的IL-6

檢測(cè)范圍： 0.078-5pg/ml

靈敏度 ：0.046pg/ml

實(shí)驗(yàn)方法：雙抗體夾心法

檢測(cè)時(shí)長(zhǎng)：4 小時(shí)(不含平衡和樣品準(zhǔn)備時(shí)間)

單孔樣品限制用量 ：血清 50ul，血漿 50ul，細(xì)胞培養(yǎng)上清 50ul

特異性：特異性和 IL-6 結(jié)合，與其它類(lèi)似物無(wú)明顯交叉反應(yīng)

儲(chǔ)存條件 ：未啟封試劑盒 2-8°C(嚴(yán)禁凍存)，6 個(gè)月

組件：

結(jié)果：

5.試劑盒穩(wěn)定性

FineTest®自主開(kāi)發(fā)的穩(wěn)定系統(tǒng)可以讓試劑盒在40度的環(huán)境下存放一周，活性不低于95%。大部分試劑盒可以在4度存放兩年活性依然能保持85-95%。基本不影響試劑盒工作和結(jié)果的準(zhǔn)確性。這同時(shí)也方便了運(yùn)輸，以及讓客戶(hù)擁有了分多次使用試劑盒的機(jī)會(huì)。

6. 更高的客戶(hù)滿(mǎn)意度

99.5%客戶(hù)對(duì)我們的產(chǎn)品滿(mǎn)意無(wú)任何售后反饋，0.5%售后通過(guò)提供技術(shù)支持得到業(yè)的響應(yīng)和解決。

技術(shù)支持團(tuán)隊(duì)和開(kāi)發(fā)團(tuán)隊(duì)、包裝運(yùn)輸人員、銷(xiāo)售代表同一棟大樓辦公，在售后服務(wù)過(guò)程中可得到必要的資源支持，無(wú)障礙快速解決客戶(hù)問(wèn)題。

我們的技術(shù)支持能夠解決任何產(chǎn)品性能問(wèn)題，從提供更詳細(xì)的技術(shù)指導(dǎo)到重發(fā)更換產(chǎn)品。如果產(chǎn)品性能問(wèn)題仍然存在，我們的技術(shù)團(tuán)隊(duì)確保通過(guò)內(nèi)部審查，以糾正和改進(jìn)未來(lái)的產(chǎn)品性能。

為了方便客戶(hù)了解和使用我們的產(chǎn)品，F(xiàn)ineTest®在官網(wǎng)上也增加門(mén)的技術(shù)支持板塊，包括顯色、數(shù)據(jù)處理、樣本制備等檢測(cè)常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案，內(nèi)容同時(shí)以文本和視頻方式呈現(xiàn)。如果客戶(hù)實(shí)驗(yàn)室不具備自行檢測(cè)條件，我們還提供代測(cè)服務(wù)。

FineTest®試劑盒產(chǎn)品從2016年至，被國(guó)內(nèi)外多所大學(xué)、研究機(jī)構(gòu)和藥學(xué)平臺(tái)使用并發(fā)表文獻(xiàn)達(dá)2600余篇，總影響因子8000余分，影響因子高至46.351分，每年引用FineTest®產(chǎn)品的文獻(xiàn)數(shù)量、影響因子都在快速增長(zhǎng)，文獻(xiàn)發(fā)表于Cell Research、Cell、Advanced Materials、Annals of the Rheumatic Diseases、Materials Today、Cellular & Molecular Immunology、Journal of Medical Virology等沿科學(xué)期刊；公司憑借質(zhì)量過(guò)硬的產(chǎn)品和完善的服務(wù)體系受到廣大國(guó)內(nèi)外用戶(hù)的青睞和認(rèn)同。