細(xì)胞增殖是生命重要的活動(dòng)。細(xì)胞增殖的過(guò)程中，DNA會(huì)進(jìn)行復(fù)制，因此可以通過(guò)檢測(cè)DNA復(fù)制來(lái)檢測(cè)細(xì)胞增殖的情況。通過(guò)檢測(cè)DNA復(fù)制來(lái)判斷細(xì)胞增殖的方法主要有2種，分別是Brdu法和EDU法。

菲恩生物FN-Click EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒在Brdu法基礎(chǔ)上進(jìn)行換代升，幫助您更快，更好，更準(zhǔn)確檢測(cè)到單一細(xì)胞的增殖。

一、原理簡(jiǎn)介

EdU(5-ethynyl-2-deoxyuridine)，中文名5-乙炔基-2-脫氧尿苷，是胸腺嘧啶脫氧核苷類(lèi)似物，EdU可以在DNA合成過(guò)程中替代胸腺嘧啶脫氧核苷摻入到新合成的DNA中。另一方面，EdU上的乙炔基能與熒光標(biāo)記的小分子疊氮化物探針，通過(guò)一價(jià)銅離子的催化發(fā)生共價(jià)反應(yīng)，形成穩(wěn)定的三唑環(huán)，該反應(yīng)非常迅速，被稱(chēng)作點(diǎn)擊反應(yīng)（Click reaction）。通過(guò)點(diǎn)擊反應(yīng)，新合成的DNA會(huì)被相應(yīng)的熒光探針?biāo)鶚?biāo)記，從而可以使用適當(dāng)?shù)臒晒鈾z測(cè)設(shè)備檢測(cè)到增殖的細(xì)胞。

二、產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

BrdU和EDU試劑盒都可以準(zhǔn)確的檢測(cè)到單一細(xì)胞的增殖。與BrdU檢測(cè)方法相比， EdU試劑盒優(yōu)勢(shì)如下：

1.反應(yīng)迅速：無(wú)需復(fù)雜抗體反應(yīng)，2.5小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)。

2.檢測(cè)靈敏：能準(zhǔn)確捕捉單個(gè)增殖細(xì)胞。

3.操作簡(jiǎn)便：試劑盒配套完善，使用便捷。

4.結(jié)果準(zhǔn)確：小分子易擴(kuò)散，無(wú)需DNA變性，保持細(xì)胞核清晰完整。

5.兼容性強(qiáng)：可與其他抗體或熒光蛋白共染，實(shí)現(xiàn)多參數(shù)檢測(cè)。

三、實(shí)驗(yàn)過(guò)程

EDU實(shí)驗(yàn)可以分為做熒光成像實(shí)驗(yàn)和流式實(shí)驗(yàn)，依據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)情況選擇實(shí)驗(yàn)方法。

EDU熒光成像流程如下：

EDU流式實(shí)驗(yàn)流程如下：

四、菲恩生物 FN-Click EdU試劑盒結(jié)果展示

1.用于流式檢測(cè)的試劑盒

Test：HL-60 cells were treated with 10 μM EDU for 4 hours.
Negative：HL-60 cells without EDU.

2.用于熒光成像的試劑盒

Test：Hela cells were treated with 10 μM EDU for 3 hours.
Negative：Hela cells without EDU.

五、常見(jiàn)問(wèn)題與建議

1.整個(gè)細(xì)胞都有EdU信號(hào)或背景信號(hào)很強(qiáng)：

可能原因：染色后洗滌不充分，導(dǎo)致非特異性染色。
建議：在染色后，務(wù)必充分洗滌細(xì)胞，以去除未結(jié)合的EdU和熒光染料，減少背景信號(hào)。

2.無(wú)陽(yáng)性信號(hào)：

可能原因：EdU濃度過(guò)低或孵育時(shí)間不足，導(dǎo)致細(xì)胞攝取的EdU量不足以形成可檢測(cè)的熒光信號(hào)。
建議：增加EdU濃度或延長(zhǎng)孵育時(shí)間，確保細(xì)胞攝取足夠的EdU。此外，不同的細(xì)胞類(lèi)型可能需要不同的孵育時(shí)間，應(yīng)根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型進(jìn)行調(diào)整。

3.信號(hào)不均勻或局部過(guò)強(qiáng)：

可能原因：細(xì)胞分布不均勻或染色過(guò)程中存在局部濃度差異。
建議：在鋪板時(shí)確保細(xì)胞分布均勻，避免細(xì)胞過(guò)密或過(guò)疏。同時(shí)，在染色過(guò)程中注意操作的一致性，避免局部濃度過(guò)高或過(guò)低。

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