流式細(xì)胞術(shù)（Flow Cytometry）是一種效率高的單細(xì)胞分析/分選技術(shù)，它能夠在細(xì)胞分子水平上通過單克隆抗體對(duì)單個(gè)細(xì)胞或其他生物粒子進(jìn)行多參數(shù)、快速的定量分析。以下將從原理和應(yīng)用兩個(gè)方面對(duì)流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行詳細(xì)介紹。

一、流式細(xì)胞術(shù)原理

流式細(xì)胞術(shù)的基本原理是使用熒光探針標(biāo)記待檢測的生物樣本，通過流式細(xì)胞儀檢測生物樣品上的被標(biāo)記的熒光信號(hào)來獲取相應(yīng)的生物學(xué)信息。其核心要素包括樣品的熒光標(biāo)記技術(shù)和流式細(xì)胞儀。

1. 熒光標(biāo)記技術(shù)

• 熒光素分子：常用到的熒光素種類包括有機(jī)小分子、熒光蛋白、復(fù)合染料、大分子染料和量子點(diǎn)等。這些熒光素分子在吸收激發(fā)光的能量后會(huì)躍遷進(jìn)入激發(fā)態(tài)，并通過釋放光子回到基態(tài)，從而發(fā)出熒光。
• 標(biāo)記方法：一類是直接利用熒光素分子與特定的化學(xué)物質(zhì)相互作用進(jìn)行標(biāo)記，如CFSE（羥基熒光素乙醋酸鹽瑰珀酰亞胺脂）與細(xì)胞的蛋白質(zhì)發(fā)生穩(wěn)定的共價(jià)結(jié)合；另一類是通過在抗體上耦聯(lián)不同的熒光素分子，利用抗體特異性識(shí)別抗原的能力進(jìn)行熒光標(biāo)記。

2. 流式細(xì)胞儀

• 構(gòu)成：主要由液流系統(tǒng)、光學(xué)系統(tǒng)和電子系統(tǒng)三部分構(gòu)成。液流系統(tǒng)負(fù)責(zé)將細(xì)胞樣本輸送到檢測區(qū)域，光學(xué)系統(tǒng)則負(fù)責(zé)激發(fā)熒光并收集熒光信號(hào)，電子系統(tǒng)則負(fù)責(zé)數(shù)據(jù)的處理和分析。
• 工作原理：在細(xì)胞樣本通過流式細(xì)胞儀的檢測區(qū)域時(shí)，激光束會(huì)照射到每個(gè)細(xì)胞上，激發(fā)熒光素分子發(fā)出熒光。這些熒光信號(hào)被收集并轉(zhuǎn)化為電信號(hào)，進(jìn)而通過電子系統(tǒng)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析。

二、流式細(xì)胞術(shù)應(yīng)用

流式細(xì)胞術(shù)自二十世紀(jì)六七十年代發(fā)明以來，已被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、血液學(xué)、腫瘤學(xué)、遺傳學(xué)、藥學(xué)、植物學(xué)、海洋生物學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)等眾多域。其主要應(yīng)用包括：

1. 免疫細(xì)胞表型分析
通過檢測免疫細(xì)胞群的表面或細(xì)胞內(nèi)標(biāo)志物，對(duì)流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行鑒定和表征。能夠準(zhǔn)確鑒定和分類免疫細(xì)胞群，如T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞等。
2. 細(xì)胞活力與凋亡分析
使用熒光染料區(qū)分活細(xì)胞、凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞，從而更詳細(xì)地了解細(xì)胞的健康和狀態(tài)。
3. 細(xì)胞周期分析
基于熒光和核酸的量之間的關(guān)系，使用核酸結(jié)合染料（如PI）進(jìn)行細(xì)胞周期分析，以監(jiān)測細(xì)胞的增殖和分裂情況。
4. 細(xì)胞因子檢測
基于流式細(xì)胞術(shù)開發(fā)的多重細(xì)胞因子檢測，已廣泛應(yīng)用于免疫細(xì)胞功能的研究和臨床診療。
5. 細(xì)胞分選
利用流式細(xì)胞儀對(duì)特定細(xì)胞進(jìn)行分選，以用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)或治療。
6. 藥物研發(fā)
流式細(xì)胞術(shù)在藥物研發(fā)中也有重要應(yīng)用，如用于靶點(diǎn)機(jī)制驗(yàn)證、抗體發(fā)現(xiàn)和表征、臨床藥理藥效評(píng)價(jià)等。
7. 其他應(yīng)用
流式細(xì)胞術(shù)還可用于細(xì)胞增殖、細(xì)胞脫顆粒、離子平衡、ROS（活性氧）水平等多種細(xì)胞功能的檢測和分析。

綜上所述，流式細(xì)胞術(shù)是一種功能強(qiáng)大的單細(xì)胞分析/分選技術(shù)，其原理基于熒光標(biāo)記技術(shù)和流式細(xì)胞儀的結(jié)合使用。其應(yīng)用范圍廣泛，涉及多個(gè)學(xué)科域，是現(xiàn)代生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中不可或缺的重要工具。

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流式檢測圖
FITC-30001 FITC/Anti-Mouse CD4(GK1.5)

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