<strike id="oyoay"><input id="oyoay"></input></strike><ul id="oyoay"></ul>

聯(lián)系我們/CONTACT US

聯(lián)系人：左經(jīng)理

電話：17764018385

手機：17764018385

地址：武漢東湖新技術(shù)開發(fā)區(qū)高新二路388號武漢光谷國際生物醫(yī)藥企業(yè)加速器1.2期C22棟一層、二層

郵編：

傳真：

郵箱：1242926414@qq.com

手機網(wǎng)站：m.finebio.cn

產(chǎn)品分類/PRODUCT CLASS

點擊次數(shù)：3278 發(fā)布時間：2022/2/22 14:05:46

我們在建立一種ELISA方法時，對于抗原抗體適工作濃度的選擇是非常重要的，不僅可以快速摸索出ELISA的條件，還可以節(jié)約測定時間和成本。

下面以夾心法測抗原為例，介紹適工作濃度的選擇方法。

a)用包被緩沖液稀釋單克隆抗體，濃度分別為10ug/ml、5.0ug/ml、2.5ug/ml、1.0ug/ml, 包被酶標板，每一濃度包被1橫行，每孔100ul。4 ℃過夜包被，洗滌3次；

b)5%脫脂奶粉封閉酶標板， 37℃孵育1h，洗滌3次；

c) 在每條包被孔中加入空白對照和標準品，每個空白對照和標準品為一組，依次加入，各100ul，37℃孵育1h，洗滌3次；

d) 在每一包被濃度的一挑中分別加入按1:2000、1：4000、1：8000、1:16000 稀釋的兔多抗， 37℃孵育1h，洗滌3次；

e) 在每一包被濃度的一條中分別加入HRP標記羊抗兔igG，稀釋度先按說明書上的推薦稀釋比進行稀釋，37℃孵育30min，洗滌5次；

f) 加TMB底物，37℃避光顯色10-15min，用2mol/L H2SO4終止反應，酶標儀450nm讀取吸光度（OD）值；

g) 測得的標準品OD值在2.0左右，陰性對照OD值小于0.1的組合為較理想的組合。

可根據(jù)初步確定的濃度縮小間距,再做進一步棋盤滴定,尋找包被條件。

注意：抗體做稀釋時用同一個原始濃度做倍比稀釋，這樣可以盡量減少由于加樣槍造成的誤差及人為誤差。

加樣方法參考下表：

注：1. 1,2,3,4條分別包被不同濃度單抗，如紅色框所示；2.縱列分別加入標準品和blank孔，相應加入稀釋好的多抗；3.整板加入推薦稀釋比的二抗。

典型數(shù)據(jù)舉例如下:如 h.il-6，參考范圍300pg/ml。

由此表可以看出，選擇包被1ug/ml，多抗用1:4000，效果較佳。

相信經(jīng)過對棋盤滴定的掌握，各種ELISA試劑盒方法建立已不成問題。

菲恩生物除提供業(yè)的成品ELISA試劑盒外，還提供ELISA定制服務，在后面文章中我們會進一步詳細介紹一個合格的ELISA試劑盒的成長過程。

原創(chuàng)作者：武漢菲恩生物科技有限公司