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技術(shù)文章

常見(jiàn)6種Western Blot封閉液的優(yōu)缺點(diǎn)

點(diǎn)擊次數(shù)：3631   發(fā)布時(shí)間：2022/3/25 13:46:02

 封閉是Western Blot 至關(guān)重要的一部分， 所以正確的封閉液選擇可以讓抗體更特異地和抗原結(jié)合，為成功的WB奠定基礎(chǔ)。雖然這個(gè)步驟操作簡(jiǎn)單，但是封閉液的選擇確是很多科研人員的難題。為了讓大家更方便的選擇適合自己實(shí)驗(yàn)的封閉液，這里給大家介紹6種不同的封閉液，以及它們的優(yōu)缺點(diǎn)。
 
1、脫脂奶粉
便宜而且買(mǎi)的封閉劑就屬脫脂奶粉了。無(wú)論是從化學(xué)制品公司還是從超市購(gòu)買(mǎi)，都可以直接拿來(lái)使用。通常封閉液的濃度為 2.5-5% （w/v）。但值得注意的是，脫脂奶粉是許多種蛋白質(zhì)的混合物，其中含有酪蛋白，是一種磷蛋白。如果你的目標(biāo)蛋白是磷蛋白的話，千萬(wàn)不要選擇脫脂奶粉，否則會(huì)有很多背景信號(hào)。即使你的目標(biāo)蛋白不是磷蛋白，因?yàn)槭堑鞍踪|(zhì)的混合物，所以也容易產(chǎn)生較高的背景信號(hào)。
 
2、牛血清白蛋白(BSA)
牛血清白蛋白是從牛血清中提純之后的一種球蛋白，是除了脫脂奶粉之外，非常常用的封閉劑。通常含有BSA的封閉液的濃度為2-5%（w/v）。但大家也可 以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)的需要來(lái)改變濃度，因?yàn)閮r(jià)格比較高，所以很多研究人員都是用盡可能低而有效的濃度。雖然BSA不是磷蛋白而且是單一蛋白，但是提純過(guò)程中有 可能含有IgG或其他血清蛋白等污染物，這些蛋白都可以和哺乳動(dòng)物抗體產(chǎn)生交叉反應(yīng)，會(huì)增加非特異性背景信號(hào) 。
 
3、全血清
全血清是許多蛋白質(zhì)的混合物，例如胎牛血清、兔血清、山羊血清等，同樣可以被用來(lái)當(dāng)做封閉劑。大家對(duì)它的使用率很低，因?yàn)楦撝谭酆虰SA相比，并沒(méi)有什么突出的好處，但價(jià)格卻更貴。通常使用的濃度為 5-10%（w/v）。像BSA一樣，它含有免疫球蛋白和血清蛋白，會(huì)和哺乳動(dòng)物抗體產(chǎn)生交叉反應(yīng)。
 
4、魚(yú)膠
用魚(yú)膠當(dāng)封閉液是從豬皮膠演變而來(lái)的。魚(yú)膠是從冷水魚(yú)的皮膚中提取出來(lái)的，即使在溫度較低的情況下也會(huì)不會(huì)凝固。通常使用的濃度為0.1-5% （w/v）。不像脫脂奶粉和BSA，它不含有任何的血清蛋白，所以就不會(huì)和哺乳動(dòng)物抗體產(chǎn)生交叉反應(yīng)，大大降低了背景信號(hào)。但是魚(yú)膠不能用來(lái)封閉生物素- 抗生物素抗體蛋白系統(tǒng)，因?yàn)樗袃?nèi)源性生物素。
 
5、聚乙烯吡咯烷酮
PVP 是傳統(tǒng)封閉液的非蛋白質(zhì)性質(zhì)的替代品。雖然早在1993年就有文獻(xiàn)發(fā)表，在封閉技術(shù)上卻是很新的產(chǎn)品。PVP是一種水溶性多聚物，可以很快和硝酸纖維素和PVDF膜結(jié)合。通常使用的濃度在0.5-2%（w/v），而且通常會(huì)和其他封閉劑一起使用。PVP 在用于檢測(cè)較小目標(biāo)蛋白的時(shí)候非常有效。
 
6、商品化封閉液
商品化封閉液通常含有提純過(guò)的蛋白，用這個(gè)封閉液的好處就是你可以確定里面不含有磷蛋白、免疫球蛋白、白蛋白、生物素 等其他封閉液中難以避免的成分。當(dāng)然，價(jià)格也就更貴。每個(gè)商品化封閉液都有自己的Protocol，基本照做就沒(méi)問(wèn)題，而且封閉時(shí)間很快。
 
相信大家現(xiàn)在對(duì)各種封閉液都有了更深的了解�？偟膩�(lái)說(shuō)，封閉液的選擇基于三樣事情：抗體、目標(biāo)蛋白和檢測(cè)系統(tǒng)。但是要想找到適合自己目標(biāo)蛋白的封閉液，并不簡(jiǎn)單。除了排出一些很明顯不合適的，剩下的就需要多花點(diǎn)時(shí)間嘗試不同種類、不同濃度的封閉液，才能找到適合的。

原創(chuàng)作者：武漢菲恩生物科技有限公司

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