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技術(shù)文章

SDS-PAGE凝膠電泳中蛋白染色液操作步驟詳解

點(diǎn)擊次數(shù):2978   發(fā)布時(shí)間:2022/5/16 14:00:33

 蛋白膠快速染色液是一種即用型考馬斯亮藍(lán)蛋白染色液,用于PAM凝膠染色,無需固定、脫色等復(fù)雜操作,整個(gè)操作可在1小時(shí)內(nèi)完成,染色10到15分鐘就能看到蛋白條帶,而背景幾乎無色。染色液具有高的靈敏度,過夜染色時(shí),檢測上限可達(dá)10ng。不含甲醇和乙酸等有毒或揮發(fā)成分,不影響操作者的健康。且適用于質(zhì)譜檢測,不會(huì)對(duì)蛋白產(chǎn)生甲基化和乙;

蛋白膠快速染色液主要應(yīng)用于SDS-PAGE凝膠電泳:是對(duì)蛋白進(jìn)行定性及半定量分析的常用,快速方便的技術(shù)。根據(jù)蛋白分子量的不同,將蛋白梯度分離。蛋白純度和分子量分析,WB實(shí)驗(yàn),IP實(shí)驗(yàn)都需要用到SDS-PAGE凝膠電泳

產(chǎn)品特點(diǎn):
快速:快10分鐘即可觀測到蛋白條帶
便捷:無需固定、脫色
高靈敏度:檢測上限10ng
背景清晰:高信噪比,過夜也不會(huì)染色過度
經(jīng)濟(jì):每塊膠僅需25ml染色液

操作說明:
  1. 電泳結(jié)束后,每塊凝膠加入100ml去離子水,微波加熱30s,水平搖床震蕩漂洗5分鐘,重復(fù)三次。
(此步為關(guān)鍵步驟,會(huì)大的影響染色效果和靈敏度)
  1. 每塊凝膠加25ml染色液,微波加熱15s,水平搖床震蕩。
  2. 蛋白條帶會(huì)在10分鐘開始逐漸顯現(xiàn),在1小時(shí)內(nèi)達(dá)到90%染色效果。
  3. 脫色步驟一般沒有必要,但可進(jìn)一步降低背景。加入100ml自來水,水平搖床震蕩30分鐘即可。
Tips
  1. 漂洗過程推薦用大號(hào)的1ml槍頭盒,使凝膠能充分振蕩起來。染色推薦用小號(hào)的1ml槍頭盒。
  2. 一個(gè)盒子可同時(shí)放入2塊膠進(jìn)行漂洗和染色(請(qǐng)勿過多,會(huì)影響效果),漂洗的去離子水和染色液加倍。
  3. 染色液于室溫避光,可保存一年。
  4. 染色液通常不建議回收使用,染色效果會(huì)變差,如有必要多重復(fù)使用1次,回收的染液請(qǐng)保存在棕色瓶內(nèi)。
實(shí)例:
12%SDS-PAGE,8cm*8cm*1.5mm,染色5min 12%SDS-PAGE,8cm*8cm*1.5mm,染色10min
12%SDS-PAGE,8cm*8cm*1.5mm,染色15min 12%SDS-PAGE,8cm*8cm*1.5mm,染色30min

與市面常見的傳統(tǒng)染色液相比

傳統(tǒng)染色液:氣味刺鼻,有害,染色1h,脫色2h,耗時(shí)長。


快速染色液:無刺激組分,無需脫色,所有操作1小時(shí)內(nèi)完成。

原創(chuàng)作者:武漢菲恩生物科技有限公司

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